HBV感染而乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)陰性很難用常規(guī)檢測(cè)方法檢出，是較為復(fù)雜的流行病學(xué)和臨床課題之一。HBsAg和HBV DNA血液篩查和預(yù)防接種至關(guān)重要。然而，流行病學(xué)對(duì)隱匿性乙型肝炎病毒感染(occult hepatitis B virusinfection，OBI)的研究主要集中于不同人群OBI患病率的橫斷面調(diào)查，鑒于研究對(duì)象的選取方法不一及檢測(cè)指標(biāo)和手段等的不同，結(jié)果差異很大。OBI作為一種特殊形式的感染類(lèi)型，正逐漸受到臨床醫(yī)師及患者的高度重視。隨著社會(huì)、經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們對(duì)健康及診療水平提出了更高的要求與期盼，特別是對(duì)臨床及醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)OBI提出了更高的要求。本文就OBI的感染機(jī)制、生物學(xué)特性及臨床特征作簡(jiǎn)要概述。
1 隱匿性乙型肝炎(OHB)
隱匿性乙型肝炎(OHB)是指除血清轉(zhuǎn)換前的機(jī)會(huì)性“窗口”(window of opportunity)外，血清和(或)肝組織內(nèi)HBV DNA(+)而HBsAg(-)或常規(guī)方法(如ELISA等)無(wú)法檢測(cè)到，伴或不伴抗-HBc或抗-HBs，是HBV感染的一種特殊形式。其發(fā)生機(jī)制尚未明確，多以輸血、母(父)嬰、器官移植等方式傳播，且與慢性肝病、肝細(xì)胞癌(HCC)的發(fā)生、發(fā)展及治療密切相關(guān)，對(duì)公共衛(wèi)生學(xué)具有重要價(jià)值。近年，聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)的廣泛開(kāi)展與應(yīng)用，特別是是外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)中HBV DNA的檢測(cè)，為OBI的真實(shí)存在提供了更多更為確切的信息。
2 OBI的發(fā)生原因及影響其檢出的因素
2.1 OBI的發(fā)生具有多種機(jī)制
2.1.1 HBV DNA復(fù)制水平低是OBI發(fā)生的原因之一
OBI的存在和臨床意義已經(jīng)被許多研究所證實(shí)，目前已有大量研究開(kāi)始關(guān)注其發(fā)生機(jī)制。臨床上，OBI存在多種形式，如肝功正常、HBsAg(-)者，可在急性HBV感染恢復(fù)后，也可能在慢性乙型肝炎(CHB)患者自發(fā)或使用抗病毒藥物后出現(xiàn)。OBI者肝臟HBV DNA水平一般低于105拷貝/ml。
2.1.2 HBV基因變異致現(xiàn)有試劑難以檢出HBsAg
OBI與抗-HBs(-)、抗-HBs低水平或孕產(chǎn)婦高病毒載量和逃避S基因突變有關(guān)。病毒變異是致OBI發(fā)生的原因之一，除少數(shù)HBsAg變異無(wú)法被檢測(cè)試劑所辨識(shí)外，多數(shù)變異可以同野毒株一樣被辨識(shí)，大多數(shù)OBI是由于HBV DNA的低水平復(fù)制所致。目前，研究主要集中在S基因，而X基因是轉(zhuǎn)錄、反轉(zhuǎn)錄和正鏈合成的起點(diǎn)，此處變異可能會(huì)影響病毒的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制，但由于X基因結(jié)構(gòu)和功能的復(fù)雜性，對(duì)其變異與OBI的關(guān)系研究相對(duì)較少。
2.2 宿主免疫應(yīng)答異常
HBV感染的轉(zhuǎn)歸取決于病毒復(fù)制和機(jī)體免疫系統(tǒng)的相互作用與平衡，細(xì)胞免疫介導(dǎo)的免疫應(yīng)答是中止HBV DNA復(fù)制的主要機(jī)制。HBV生活周期中產(chǎn)生的共價(jià)閉合環(huán)狀DNA分子(ccc DNA)作為附加體存在于細(xì)胞核中，仍然作為與OBI有關(guān)的分子基礎(chǔ)以及基因轉(zhuǎn)錄的模板。隱匿性HBV攜帶者HBsAg(-)狀態(tài)是強(qiáng)大的抑制病毒復(fù)制的機(jī)制，可能是由于宿主的免疫反應(yīng)，合并感染其他傳染性病原體和遺傳因素等所致。
2.3 受其他病毒感染的干擾
對(duì)合并OBI的丙型肝炎病毒(HCV)慢性感染者進(jìn)行抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(antiretroviral therapy，ART)時(shí)，隨著HCV RNA復(fù)制被抑制，HBV DNA載量卻在增加。HBV和HCV混合感染肝細(xì)胞中HBV DNA水平低于單純HBV感染的肝細(xì)胞，混合感染時(shí)存在相互干擾、抑制，血清HBsAg表達(dá)通常被延遲，且水平相對(duì)較低、持續(xù)時(shí)間相對(duì)較短，可能與HCV核心蛋白抑制HBV相關(guān)。感染血吸蟲(chóng)也能抑制肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞HBV DNA的復(fù)制。另外，長(zhǎng)期飲酒可以降低HBV DNA的表達(dá)，可以部分解釋HBsAg(-)酗酒者中HBV DNA(+)的高發(fā)生率。
2.4 檢測(cè)試劑的靈敏度和質(zhì)量問(wèn)題
血清HBV DNA特異性抗原或抗體水平低于該試劑盒檢測(cè)的靈敏度時(shí)，乙型肝炎病毒血清學(xué)標(biāo)志物(hepatitis B virusmarkers，HBV-M)常會(huì)漏檢。
3 OBI檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證實(shí)存在OBI。HBV DNA PCR檢測(cè)是檢測(cè)OBI的金標(biāo)準(zhǔn)。確立OBI的診斷，需對(duì)HBVDNA基因組的不同區(qū)段擴(kuò)增并重復(fù)檢測(cè)。研究表明，OBI為二次隱性感染(SOI)，這種形式的殘余感染是一種常見(jiàn)的、長(zhǎng)期的后果。也有研究表明，OBI可以促進(jìn)肝纖維化及肝硬化的發(fā)生與進(jìn)展。血液透析患者預(yù)防HBV感染仍然是巨大挑戰(zhàn)。一些地區(qū)OBI在血液透析患者中普遍存在，并與年齡、糖尿病等因素有直接的關(guān)系。
4 OBI的檢測(cè)包括HBsAg和HBV DNA檢測(cè)兩方面
4.1 檢測(cè)試劑
大多檢測(cè)試劑只針對(duì)某一基因(血清型)，對(duì)其他基因(血清型)靈敏度相對(duì)較差。不同試劑對(duì)HBV DNA變異株的檢測(cè)能力相差甚遠(yuǎn)。有的ELISA試劑僅采用單一單克隆抗體，缺少對(duì)突變株的檢測(cè)能力，造成漏檢;而含多克隆抗體的檢測(cè)試劑能有效識(shí)別各種逃逸變異株，較大程度避免可能出現(xiàn)的漏診。HBV感染后出現(xiàn)不同HBV-M，HBV-M血清學(xué)檢查結(jié)果不同具有不同的判定意義。OBI患者通常會(huì)出現(xiàn)抗-HBc和(或)抗-HBs(+)，但有時(shí)HBV-M全為(-)。電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)對(duì)HBsAg檢測(cè)靈敏度可達(dá)0.09 ng/ml;微粒子酶免法對(duì)HBsAg檢測(cè)的靈敏度為0.17～0.2 ng/ml，很大程度上避免了HBsAg的漏檢。
4.2 OBI的確診
建議用敏感度高的PCR(如nestedPCR)來(lái)檢測(cè)HBV DNA，至少采用3對(duì)或以上針對(duì)HBV DNA不同基因區(qū)的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，因HBV DNA水平較低，只有兩對(duì)以上引物擴(kuò)增同時(shí)陽(yáng)性才能確診為OBI。逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測(cè)OBI具有高度的靈敏性。由于成本、診斷、療效等原因，對(duì)防止HBV通過(guò)輸血傳播的高靈敏度分析采用核酸擴(kuò)增技術(shù)(NAT)仍存在爭(zhēng)議。
5 OBI檢測(cè)的臨床價(jià)值
綜上所述，HBV是一種嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的病原體，是CHB、肝硬化和原發(fā)性肝癌發(fā)生的主要原因之一。臨床研究和實(shí)踐充分證實(shí)，OBI是一種特殊形式的HBV隱性感染，其發(fā)生與諸多因素相關(guān)。不同因素在OBI發(fā)生中的主次地位不同，不同地區(qū)和人群中的流行規(guī)律也不確切，而臨床實(shí)踐中檢測(cè)方法和判定標(biāo)準(zhǔn)的不一致，降低了不同研究檢測(cè)結(jié)果間的可比性。因此，OBI檢測(cè)方法和診斷、判定標(biāo)準(zhǔn)的統(tǒng)一，已成為OBI研究亟待解決的重要課題。因此，迅速、準(zhǔn)確的診斷，尤其是OBI的檢出，對(duì)乙型病毒性肝炎的治療和預(yù)后具有極其重要的價(jià)值。
摘自：《中國(guó)肝臟病雜志(電子版)》2016年 第8卷 第1期
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